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同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)
2015-03-12 14:22:04   浏览次数:0  文字大小:【】【】【

同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitationiTRAQ) 技术由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。


原理

iTRAQ 技术采用4种或8种同位素编码的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,而后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。

iTRAQ试剂是一种小分子同重元素化学物质,包括三部分:一端是报告部分reporter group,另一端是肽反应部分peptide reactive group,中间部分是平衡部分balance group

将蛋白质裂解为肽段,然后用iTRAQ试剂进行差异标记。由于iTRAQ试剂是等量的,即不同同位素在标记同一多肽后在第一级质谱检测,分子量完全相同,用串联质谱方法对在第一级质谱检测到前体离子(precursor ion)进行碰撞诱导解离,产物离子通过第二级质谱进行分析。在二级质谱分析过程中,报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂,质量平衡基团丢失,产生低质荷比(m/z)的报告离子。由于二级质谱可分析相对分子质量相差1的报告基团,不同报告基团离子强度的差异就代表了它所标记的多肽的相对丰度。同时,多肽内的酰胺键断裂,形成一系列 b 离子和 y 离子,得到离子片段的质量数,通过数据库查询和比较,可以鉴定出相应的蛋白质前体。


实验样本:血浆、体液、组织、植物、细胞培养物、细菌及真菌等样本均可适用。

实验设计:样本制备、蛋白质同位素标记、高效液相分离、MS质谱分析、数据检索

 iTRAQ.png


技术特点

 可同时对8个样品进行蛋白差异分析,节省样品的用量和检测的时间
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二级碎片离子信号增强,产生质量更高的二级质谱,确保鉴定结果高的可信度
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可进行多个时间点、细胞周期、细胞信号传导整个过程蛋白质组动态变化的监测
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可分析详细分期型的临床疾病样本,并可设计样本重复,甚至可以进行个体样本的研究


检测仪器

TripleTOF 5600.jpg

TripleTOFTM5600系统把广泛定性探索,快速全貌解析,和高分辨率定量结合在一个单一精确质量平台的系统。在日采集中,它结合了最高的检测灵敏度,高分辨率和至少5倍最佳采集速度,以及稳定的质量准确度。是快速评估药物代谢稳定性、药物在体内特征和最终代谢产物鉴定的理想平台。

 

 


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