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蛋白质定量技术服务
2015-03-11 14:40:00   浏览次数:0  文字大小:【】【】【

BPRC拥有AB SCIEX TripleTOF™ 5600、Q Exactive plus质谱仪、Thermo Scientific LTQ Orbitrap Velos、TSQ Quantum XLS和QTRAP 5500 LC/MS/MS等质谱仪,具备蛋白质制备、分离、纯化及质谱鉴定和定量等实验条件。拥有丰富的定量蛋白质组学技术服务经验。

服务项目

Ø  iTRAQ蛋白质定量

Ø  SILAC蛋白质定量

Ø  无标记蛋白质定量(Label-free

Ø  SRM/MRM蛋白质定量

Ø  绝对定量(AQUA

Ø  蛋白质组学半定量

Ø  SILAC-AQUA蛋白质组学定量及目标验证

Ø  基于SILAC技术的定量(qConCAT)

Ø  转录因子(包括核受体)、泛素化蛋白精确定量

Ø  差异荧光凝胶电泳分析(DIGE

SILAC蛋白质定量

SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸,细胞经5-6个倍增周期后,稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合,经分离、纯化后进行质谱鉴定。

研究人员通过在细胞培养时加入稳定的同位素标记的氨基酸,用这种方法进行双重的蛋白质序列分析,从而可以跟踪蛋白质的转归或者对不同培养条件下蛋白质的表达情况进行比较。

SILAC.jpg

 

 

转录因子(包括核受体)、泛素化蛋白精确定量

目前实验室已经在单一细胞中发现超过300个泛素化位点,200个转录因子,其中包含超过37个核受体。


转录因子.png

Profiling 37 Nuclear Receptor Proteins in Mouse LiverUnpublished paper

  

 

Comparison of relative.png

     Comparison of relative poly-Ub binding efficiency between GST-qUBA and GSTUBA.#

 

基于SILAC技术的定量(qConCAT)

采用人工合成、SILAC培养基诱导、表达、标记肽段作为内参的方法,可准确定量差异超过10%以上的蛋白。


qConCAT1.jpg

qConCAT2.png

 


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蛋白质组学国家重点实验室

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